? 關(guān)于伏馬毒素  ?

   伏馬毒素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素，是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。主要污染糧食及其制品，并對某些家畜產(chǎn)生急性毒性及潛在的致癌性，已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點(diǎn)。目前我國現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素XIAN量》（GB2761-2017）尚未涉及伏馬毒素的XIAN量，不過在《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078—2017）規(guī)定了部分飼料原料和飼料產(chǎn)品中的FB1和FB2總量的XIAN量標(biāo)準(zhǔn)。其中飼料原料玉米及其加工產(chǎn)品、玉米酒糟類產(chǎn)品、玉米青貯飼料和玉米秸稈中伏馬毒素的XIAN量為 60 mg/kg，其他飼料產(chǎn)品中伏馬毒素的XIAN量在5～50 mg/kg。

? 關(guān)于檢測方法?

GB 5009.240-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中伏馬菌素的測定 （將于2024年3月實(shí)施）

LS/T 6130-2017 糧油檢驗(yàn) 糧食中伏馬毒素B1、B2的測定 超高效液相色譜法

本方案采用IAC-107伏馬毒素免疫親和柱

IAC-107伏馬毒素免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的伏馬毒素B1 、B2 、B3 . 伏馬毒素免疫親和柱廣泛地應(yīng)用于糧食、食品、飼料、等樣品的提取，該方法速度快、操作簡單、準(zhǔn)確性高，對準(zhǔn)確靈敏的測定樣品中的伏馬毒素起到十分重要的作用。

? 操作流程?

一、樣品前處理

1.樣品提取及稀釋

1.2 移取2.0mI濾液加入48mL0.1%的吐溫/PBS稀釋混勻。

2.1將免疫親和柱連接于玻璃注射器下準(zhǔn)確移取50.0mL上述樣品溶液注入玻璃注射器中。

2.2將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s的流速緩慢通過免疫親和柱,直至空氣進(jìn)入親和柱中。

2.3用10mL水淋洗親和柱流速為1滴/s~2滴/s.直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去全部流出液，抽干小柱。

2.4準(zhǔn)確加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脫流速約為1滴/s,收集洗脫液。50°C下氮?dú)鉂饪s吹干后，用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL，待檢測。

二、液相條件及衍生方法

柱前衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 體積比)用磷酸將PH值調(diào)到3.3

檢測器: 激發(fā)波長335nm 發(fā)射波長440nm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生方法：取100uL標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品凈化液于進(jìn)樣瓶中加入100uL OPA衍生試劑A渦旋混合30s，在 2分鐘內(nèi)進(jìn)樣分析。

柱后衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動相: 甲醇/(65+35)

檢測器:激發(fā)波長335nm發(fā)射波長440mm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生溫度: 50℃

衍生泵流動相: OPA行生試劑B

HP-L10柱后衍生系統(tǒng)  

HP-L20柱后衍生系統(tǒng)

? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果?

1、柱效回收：

2、樣品添加回收：取玉米樣品，伏馬B1B2B3混標(biāo)添加各1000ppb。

3、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品圖譜

圖1  柱前衍生標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖（出峰順序B1，B3，B2）

圖2  柱后衍生標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖（出峰順序B1，B3，B2）

     圖4  玉米加標(biāo)液相色譜圖